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紫外可見分光光度計的定量分析方法

更新時間：2025-05-06

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紫外可見分光光度計的定量分析方法是基于朗伯-比爾定律（A=εbc）展開的，通過測定溶液對特定波長光的吸光度來計算物質(zhì)濃度，其核心方法及要點如下：

一、標(biāo)準(zhǔn)曲線法（常用方法）

操作步驟

配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度梯度已知）。

在選定波長下，依次測定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。

以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

測量待測樣品吸光度，通過曲線查得濃度。

適用場景

適用于樣品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)化學(xué)性質(zhì)相似、無顯著干擾的情況。

需保證標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好（R²≥0.999），濃度范圍覆蓋待測值。

注意事項

需定期校準(zhǔn)儀器，確保吸光度測量精度。

避免標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度過高導(dǎo)致偏離線性范圍。

二、標(biāo)準(zhǔn)加入法（克服基體干擾）

操作步驟

測量待測樣品原液的吸光度（A?）。

向原液中加入不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制系列加標(biāo)樣品，分別測量吸光度（A?,A?,...）。

以加入標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，外推至橫軸交點即為待測物濃度。

適用場景

適用于樣品基體復(fù)雜、背景吸收顯著的情況。

可有效消除基體效應(yīng)對測定的干擾。

注意事項

需保證加標(biāo)體積遠小于樣品體積（通常≤10%）。

外推法依賴線性假設(shè)，需驗證工作曲線線性。

三、吸收系數(shù)法（直接計算法）

操作步驟

測定待測溶液在特定波長下的吸光度（A）。

已知物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)（ε）和液層厚度（b），通過公式c=A/(εb)計算濃度。

適用場景

適用于ε值準(zhǔn)確已知的純物質(zhì)分析。

無需繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，操作簡便快捷。

注意事項

ε值受溫度、溶劑、pH等因素影響，需嚴(yán)格控制實驗條件。

僅適用于單一組分或組分間無光譜干擾的情況。

四、多組分同時測定法（復(fù)雜體系分析）

雙波長法

選擇兩個波長（λ?、λ?），使其中一物質(zhì)在λ?有吸收、另一物質(zhì)在λ?有吸收。

通過聯(lián)立方程消除干擾組分影響，分別計算各組分濃度。

三波長法

適用于嚴(yán)重重疊光譜，通過三個波長下的吸光度值建立方程組求解。

導(dǎo)數(shù)光譜法

利用吸光度對波長的導(dǎo)數(shù)（如一階、二階導(dǎo)數(shù)）消除背景干擾，提高分辨率。

五、方法選擇依據(jù)

樣品特性

簡單體系：優(yōu)先選用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或吸收系數(shù)法。

復(fù)雜基體：采用標(biāo)準(zhǔn)加入法或多組分分析法。

分析目的

快速篩查：吸收系數(shù)法更高效。

精準(zhǔn)定量：標(biāo)準(zhǔn)曲線法或標(biāo)準(zhǔn)加入法更可靠。

儀器條件

需保證儀器波長準(zhǔn)確度（±0.3nm）、吸光度精度（±0.002Abs）。

比色皿需匹配波長范圍（石英用于紫外區(qū)，玻璃用于可見區(qū)）。

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